大腸桿菌表達外源蛋白,在超聲破碎的時候,用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,然后超聲的效果較好,1%triton-X-100的作用還是很明顯的,對其他的一些**同樣起作用,比如鏈霉菌。
**沉淀直接加樣品1buffer,再加5ul的巰基乙醇,混勻,離心,煮沸10min,直接上樣,染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達重組蛋白后超聲波破碎細胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一會就產生大量泡沫,影響了破碎功率,pbs和tris緩沖液都是這樣,*后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在這些未破碎的細胞中。
1*會產生氣泡是因為你的探頭位置沒放好。探頭一定要接近底部,約1cm(我一般是距底部0.5mm)。功
率根據儀器不同會有所不同,但你可以觀察液面,有波動但不要太劇烈就好。