大腸桿菌是超聲波破碎儀相對容易破碎的樣品，通常大家都是破碎液離心后，取上清和沉淀分別用SDS-PAGE檢測，考染后，查看蛋白條帶，但很多人會發(fā)現(xiàn)沒有條帶？這種情況就要檢查破碎前的樣品是否正常、超聲是否滿足、電泳儀是否正常等等多個問題，這個單獨說一下采用必能信超聲波破碎儀這個步驟破碎大腸桿菌需要注意什么，希望能給您帶來幫助。
1、 樣品量體積、濃度是否合適？
體積過小的情況下（如1ml以下），需要考慮非接觸式超聲方式，接觸式超聲方式在如此小量情況下，探頭無法到達(dá)液面足夠距離，導(dǎo)致超聲能量無法足夠釋放，破碎效果受影響，而非接觸式方式就不用有此擔(dān)心。
菌液取得太少，PBS的量太大，導(dǎo)致濃度太低，也無法收集足夠的蛋白，一般搖瓶培養(yǎng)的菌，100ml菌液對應(yīng)的破菌液為10-20ml。
2、 樣品是否真正控溫？
由于超聲釋放能量的同時，還會釋放大量的熱，由此蛋白很容易變性，可選用冰浴法或冷卻循環(huán)水方式控溫，超聲波破碎儀也應(yīng)選擇電能輸入低，轉(zhuǎn)換效率高的品牌，轉(zhuǎn)換效率低的破碎儀，會產(chǎn)生額外大量熱能，可能會導(dǎo)致以上控溫方式失效。
3、 如何降低泡沫的產(chǎn)生？
產(chǎn)生泡沫的同時，超聲也就失去意義了，不僅無法正常釋放能量，還會過載停機，損傷探頭。想要降低泡沫產(chǎn)生，探頭需要盡量深入到樣品底部，如依然效果不佳，在不能調(diào)整樣品量的情況下，可選用非接觸式超聲方式，如可增加樣品量，問題就迎刃而解。
所以，選擇一款適合的超聲波破碎儀尤為重要，不僅要在較低電能輸入下，既能完成樣品破碎，又能有效減少額外熱量產(chǎn)生。
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